假如背景過(guò)高，而您懷疑洗滌不夠時(shí)，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。這種封鎖液便宜、不亂，在去除洗滌過(guò)程中的一些非特異結(jié)合上很有用。假如濃渡過(guò)高，或者未準(zhǔn)確稀釋，則會(huì)導(dǎo)致高背景。常用的蛋白封鎖液包括牛血清白蛋白（BSA）、脫脂奶粉、正常血清和魚(yú)明膠。封鎖液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛伏的結(jié)合位點(diǎn)。ELISA實(shí)驗(yàn)的原理好像很簡(jiǎn)樸，不過(guò)乎固定抗原，添加一抗、二抗和底物，間中夾雜著洗滌和封鎖。
假如您的背景過(guò)高，懷疑封鎖不充分，那么您可以嘗試使用更高濃度的封鎖液，或適當(dāng)延長(zhǎng)封鎖時(shí)間。血清組分的內(nèi)在多樣性可使它有效攔截很多不同類型的分子相互作用。另一個(gè)選擇是使用蛋白和非離子型去污劑這兩種封鎖液，后者可協(xié)助洗滌過(guò)程中的封鎖。解決這個(gè)題目的一種方法是使用雞或魚(yú)的正常血清。好的封鎖液應(yīng)降低非特異性結(jié)合，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢測(cè)試劑發(fā)生相互作用。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，我們是否能獲得有意義的信息，這在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。
假如您的ELISA不幸地碰到了高背景，那么也無(wú)需太擔(dān)心，依次查看ELISA系統(tǒng)中的組分，并排除可能存在的題目。記住，非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。不外，它的缺點(diǎn)在于能與Protein A和IgG抗體相互作用。為了防止這一點(diǎn)，切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。請(qǐng)勿使用高濃度（正常濃度為0.01-0.1%），它會(huì)降低特異結(jié)合，產(chǎn)生假陰性。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。目前主要有兩種類型的封鎖液：蛋白和非離子型去污劑。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。
假如您一直被背景題目所困擾，那么也許您該花些時(shí)間來(lái)優(yōu)化封鎖液。
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